高效液相色谱仪基本操作方法，高效液相色谱仪的使用方法及应用

很多朋友对高效液相色谱仪基本操作方法，高效液相色谱仪的使用方法及应用不是很了解，六月小编刚好整理了这方面的知识，今天就来带大家一探究竟。

HPLC的使用方法1、开机设置参数(检测波长和流速)，更换所需的流动相，检查色谱柱是否正确。2、排空并更换管道中的流动相，冲洗进样阀并清洗进样针。3、冲洗色谱柱进行平衡，在此期间可以对样品进行处理，并预先登记样品信息。4、平衡后进入空白测试，消除系统污染。

5、进样柱稳定后，等待操作结束(期间清洗进样针)，计算积分，出具报告。具体操作步骤如下1、开机操作：(1)接通电源。与Harb连接时，注意Harb电源，打开电脑，打开Bootp服务器(一般在启动时打开)；(2)从上到下打开各部件的电源。当Bootp服务器显示有信号时(有六行字符)，打开工作站(先打开行)；

(3)打开10%异丙醇溶液冲洗泵头的开关(需用针扎)，控制流量，以能流出的最小流量为准；(4)注意每个流动相留下的溶液的体积设置。如果设定的体积低于最小限制，泵将自动停止。注意泵液的体积，及时补充液体；(5)使用过程中要经常观察仪器的工作状态，及时正确处理各种突发情况。

2、用用过的流动相冲洗系统一定时间(如果用过的流动相是生理盐水流动相，必须用水冲洗20分钟以上再换成生理盐水流动相)，在正式进样分析前30min左右打开D灯或W灯，延长灯的使用寿命；3、建立色谱操作方法，注意保存以自己命名的方法，不要覆盖或删除别人的方法和实验结果；

4、使用手动进样器进样时，进样前后应使用针头洗涤液清洗进样注射器。通常，针头洗涤液与样品液是相同的溶剂。注射前，必须用样品液清洗注射器3次以上，并消除注射器内的气泡。5、溶剂瓶中砂芯的过滤头容易破碎，更换流动相时要注意保护。当发现滤芯头脏污或有细菌时，不允许用超声波清洗，可以用5%的稀硝酸溶液浸泡后再清洗；

6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管道30分钟以上，再用甲醇冲洗。冲洗时关闭D灯和W灯；7、关机时，关闭泵、检测器等。先关工作站，再关机器，最后自下而上关掉色谱仪的部件，关掉冲洗泵液的开关；8、用户必须认真执行仪器使用登记制度，不要擅自拆卸仪器。流动相：

1、色谱纯试剂，流程选用高纯水或双蒸水，过滤后使用酸碱溶液和缓冲溶液。过滤时注意区分水系膜和油膜的适用范围；2、水相流动相需要经常更换(一般不超过2天)，防止长菌变质；

3、使用双泵时，在A、B、C、D四个相当中，如果使用的流动相中有含盐流动相，则含盐流动相放在A、D中(进液口位于混合器下方)，无盐流动相放在B、C中(进液口位于混合器上方)；A、B、C、D四个储液器中有一个是棕色的瓶子，用来储存水相的流动相。通过过滤或离心处理样品，以确保样品不含固体颗粒；

2、流动相已使用或弱于流动相(如果色谱柱颠倒，则极性大于流动相；如果是正常柱，极性小于流动相)，尽量用流动相配制样品溶液；手工注射时，注射量应尽可能小，使用定量管时，注射量应为定量管的3 ~ 5倍；色谱柱1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH范围、流动相类型等；2、使用合格的流动相；

3、使用保护柱；4、如果使用的流动相是含盐的流动相，反相色谱柱应先用水或低浓度甲醇水(如5%甲醇水溶液)洗涤，再用甲醇洗涤。色谱柱5、不用时，应用甲醇清洗，然后两端密封保存。6、不要用高压冲洗色谱柱；7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；

高效液相色谱的特点是——的高压可达150 ~ 300 kg/cm2。色谱柱每米压降大于75 kg/cm2。高速——的流量为0.1 ~ 10.0 ml/min。高效的——塔板数可达5000个/m，一根色谱柱可同时分离多达100种组分。高灵敏度3354紫外检测器的灵敏度可以达到0.01ng，同时，消耗的样品更少。与经典的液相色谱法相比，高效液相色谱法具有以下优点：速度快。——分析一个样品通常需要15 ~ 30分钟，有的样品甚至可以在5分钟内完成。

高分辨率——。可以选择固定相和流动相，以达到最佳的分离效果。——紫外检测器的灵敏度为0.01ng，荧光和电化学检测器的灵敏度为0.1pg，色谱柱可重复使用。——可以用一根色谱柱分离不同的化合物。样品量少，易于回收。——样品通过色谱柱后不会被破坏，可以收集或制备单一组分。

高效液相色谱的应用只要求样品可以制成溶液，不受样品挥发性的限制。流动相可选择范围广，固定相种类多，可分离热不稳定和不挥发、解离和不解离、各种分子量范围的物质。

结合样品预处理技术，高效液相色谱实现的高分离度和高灵敏度使得分离和同时测定具有非常相似性质的物质成为可能，并且可以分离复杂相中的痕量组分。随着固定相的发展，使得在充分保持生化物质活性的条件下完成生化物质的分离成为可能。

高效液相色谱法已成为解决生化分析问题的最有前途的方法。高效液相色谱具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可重复使用、流出液组分易于收集等优点，广泛应用于生物化学、食品分析、医学研究、环境分析、无机分析等领域。高效液相色谱与结构仪器的结合是一个重要的发展方向。

液相色谱-质谱(LC-MS)技术已引起广泛关注，如氨基甲酸酯类农药和多核芳香烃的分析。液相色谱与红外光谱的结合也发展很快，如水中烃类和海水中非挥发性烃类的测定，在环境污染分析方面有了新的进展。

以上知识分享希望能够帮助到大家！